Atès que els fàrmacs proteic pèptids són majoritàriament substàncies bioactives

Com que els fàrmacs de pèptids proteics són majoritàriament substàncies bioactives i l'activitat biològica no només depèn de l'estructura primària del fàrmac, sinó que també està estretament relacionada amb les estructures secundàries i terciàries, el bioassaig és un mètode únic i necessari per estudiar la farmacocinètica d'aquesta classe. Els bioassaigs tenen dos propòsits, determinar directament les concentracions de fàrmacs en fluids corporals i identificar l'activitat biològica dels fàrmacs marcats. Els seus mètodes es poden dividir en dues categories principals.
1.1.1 Anàlisi in vivo Mètode convencional de glucosa en sang de ratolí amb insulina, etc., a més de diferents mètodes establerts segons l'activitat biològica de diversos tipus de polipèptids proteics, com els neutròfils de mobilització IL-8 en experiments de conill establerts segons a la naturalesa de la IL-8 pot mobilitzar un gran nombre de neutròfils de l'os [1]. Aquest tipus de mètode reflecteix de manera més intuïtiva l'activitat biològica, però implica tot l'animal, requereix molt de temps i és laboriós, té poca sensibilitat i té una gran variació.
1.1.2 L'anàlisi de teixits (cèl·lules) in vivo, com ara NGF, estimula el creixement dels ganglis de l'arrel dorsal del pollastre, l'oxitocina en el mètode uterí ex vivo de rata, etc. Amb el desenvolupament de la biologia molecular, s'han establert moltes línies cel·lulars dependents específiques i sensibles, i el cultiu cel·lular s'ha convertit en el mètode més comú. Segons els diferents mecanismes d'interacció del pèptid proteic amb les cèl·lules, hi ha moltes operacions específiques. Com els assajos de proliferació, que són ràpids i sensibles, però una mica menys específics; Antiproliferació ja que el sistema de detecció és senzill, sensible i específic; Els assaigs de reducció de l'efecte citopàtic [2], basats en fàrmacs amb activitat antiviral com l'interferó, protegeixen les cèl·lules del dany viral, el mètode és intuïtiu i sensible, però pot interferir amb els subtipus de pèptids. Els mètodes anteriors es basen en l'augment i la disminució del nombre de cèl·lules com a indicadors quantitatius i efectius, i els mètodes de recompte inclouen el mètode de recompte directe i el mètode de recompte indirecte, aquest últim inclou el mètode MTT, el mètode d'incorporació d'isòtops (3H, 14C), etc. A més, hi ha proves basades en la interacció indirecta dels polipèptids de la clara d'ou amb les cèl·lules, com el mètode d'inducció d'anticossos combinat amb la immunodetecció [3], el mètode de descomposició induïda per enzims combinat amb la reacció enzimàtica [4], etc. En general, els mètodes de cultiu cel·lular tenen els avantatges de sensibilitat i especificitat, objectivitat i fiabilitat, però les seves mancances també són evidents. En primer lloc, els bioassaigs no poden quantificar petits metabòlits inactius i rastrejar la seva dinàmica in vivo; En segon lloc, les mostres existeixen majoritàriament en sèrum humà o animal, i la interferència de substàncies endògenes en sèrum i la reacció creuada de possibles factors endògens afecten l'especificitat del mètode. A més, sovint es requereixen citocines de llindar per iniciar processos biològics, la qual cosa redueix la sensibilitat del mètode; El cultiu a llarg termini de cèl·lules de soca dependents és propens a la mutació que afecta l'especificitat de l'assaig.